產(chǎn)品概述：

Thermo Scientific Pierce 細(xì)胞表面蛋白生物素化和分離試劑盒能實(shí)現(xiàn)質(zhì)膜蛋白的選擇性生物素化、增溶和富集。

細(xì)胞表面蛋白生物素化和分離試劑盒的特點(diǎn)包括：
?提高性能—試劑盒和方案經(jīng)過重新設(shè)計(jì)，可提高生物素化質(zhì)膜蛋白的富集和提取效率，同時(shí)較大程度減少細(xì)胞內(nèi)蛋白污染
?優(yōu)化—方案已被刷新，從而縮短了處理時(shí)間和步驟數(shù)，試劑配方經(jīng)過優(yōu)化，可提高性能
?兼容性—已使用懸浮和貼壁細(xì)胞系對試劑進(jìn)行驗(yàn)證，并提供了 MS 樣品制備的其他說明
?經(jīng)驗(yàn)證應(yīng)用—試劑和程序與 Western 印跡和 MS 應(yīng)用兼容

該易于使用的試劑盒提供了實(shí)現(xiàn)細(xì)胞表面蛋白的理想標(biāo)記和后續(xù)分離的所有必要組分和程序。緩沖液預(yù)先配制，可生成一致的結(jié)果。哺乳動(dòng)物細(xì)胞首先用 EZ-Link Sulfo-NHS-SS-生物素（是一種硫醇可裂解的胺反應(yīng)性生物素化試劑）標(biāo)記。細(xì)胞隨后被裂解并用 NeutrAvidin 瓊脂糖捕獲標(biāo)記的蛋白。二硫蘇糖醇 (DTT) 用于洗脫以還原生物素標(biāo)記中的二硫鍵，從而釋放不帶生物素標(biāo)記的結(jié)合蛋白。本試劑盒包含足夠進(jìn)行 8 次實(shí)驗(yàn)的試劑，由 2 個(gè) 85-95% 匯合的 15 cm 培養(yǎng)皿或 4 個(gè) 75 cm2燒瓶組成。

細(xì)胞表面蛋白代表細(xì)胞蛋白的重要子集并在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞粘附、離子轉(zhuǎn)運(yùn)中起著重要作用。這些蛋白具有多個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，因此難以高效提取和分離。高效提取所需的嚴(yán)苛去污劑和條件通常會在分離后導(dǎo)致質(zhì)膜蛋白的變性和污染。作為備選方案，該試劑盒利用膜不可透過性、胺反應(yīng)性 sulfo-NHS-SS-生物素高效標(biāo)記具有可獲取賴氨酸的細(xì)胞表面蛋白。裂解、捕獲、洗滌和洗脫條件已經(jīng)過優(yōu)化，可實(shí)現(xiàn)高效富集和分離，同時(shí)盡可能減少細(xì)胞內(nèi)蛋白的污染。

此方案已針對多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞系（包括貼壁和懸浮細(xì)胞）進(jìn)行了優(yōu)化，適用于處理細(xì)胞和未處理細(xì)胞之間或一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞系之間的差異表達(dá)分析。細(xì)胞表面蛋白分離的選擇性和有效性已通過 Western 印跡和 LC-MS 分析驗(yàn)證。