Thermo Scientific Pierce Ellman 試劑 (DTNB) 與巰基基團反應生成有色產(chǎn)物，提供了一種可靠的方法來測量溶液中的還原半胱氨酸和其他游離巰基。

Ellman 試劑（5,5'-二硫代-雙-[2-硝基苯甲酸]）用于通過與含巰基基團化合物（如半胱氨酸）的標準曲線進行比較，估計樣品中的巰基。或者，巰基基團可使用 TNB 的消光系數(shù)（412nm 處 14,150M-1 cm-1）進行測定。Ellman 試劑已用于巰基估算以外的應用，例如采用柱前衍生化程序的 HPLC 烷基硫醇測定和若干酶活性位點硫醇的研究。

Ellman 試劑的特點：

?巰基測定—與游離（還原）巰基基團 (—SH) 定量反應，以生成可檢測的 TNB 產(chǎn)物
? 比色檢測—有色產(chǎn)品支持在比色皿或微孔板中進行分光光度測量 (λmax = 412nm; ε = 14,150/M·cm)
? 成熟的分析方法—已明確表征的化學試劑可利用消光系數(shù)計算或通過與半胱氨酸標準進行比較，對肽或蛋白巰基基團進行定量測定

試劑特性
? 別名：DTNB、Ellman 試劑
? 化學名稱：5,5'-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)
? 可與以下基團發(fā)生反應：巰基基團 (—SH)
? 化學式：C14H8N2O8S2
? CAS 號：69-78-3
? 分子量：396.35
? 形態(tài)：黃色結晶粉末

DTCNB 與游離巰基基團反應生成混合二硫化物和 2-硝基-5-硫苯甲酸 (TNB)。在該反應中，DTNB 的靶標是一個游離巰基基團的偶聯(lián)基 (R—S-)。因此，此反應的速率取決于多種因素：(1) 反應 pH 值、(2) 巰基的 pKa'和 (3) 空間和靜電效應。TNB 是此反應生成的有色物質(zhì)，可見光范圍內(nèi)具有高摩爾消光系數(shù)。Ellman (1959) 最初報告 TNB 的摩爾消光系數(shù)為 13,600M-1 cm-1（412 nm，pH 值 8.0）。因此，文獻中經(jīng)常引用這一數(shù)值。然而，后來的研究顯示，在 412 nm 處 14,150M-1 cm-1 的值可以更準確地反映摩爾消光系數(shù)。TNB 的消光值不受 pH 值在 7.6 至 8.6 之間的變化的影響。然而，TNB 的消光值在其他溶劑中有所不同。